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用pGAP启动子在P.pastoris中组成型表达漆酶

文献类型： 中文期刊

作者： 张泽华 1 ; 杨穗珊 2 ; 张爱联 2 ;

作者机构： 1.海南大学农学院

2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所、农业部热带作物生物技术重点开放实验室

关键词： 漆酶;毕赤酵母;pGAP启动子;基因表达;酶活力

期刊名称： 生物技术

ISSN： 1004-311X

年卷期： 2011 年 21 卷 06 期

页码： 24-27

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:用pGAP启动子在P.pastoris中组成型表达漆酶。方法:用PCR从枯草芽孢杆菌基因组中扩增漆酶基因lac2。用NotⅠ和EcoRⅠ双酶切将lac2基因重组于表达载体PGAP9K。通过电转法将其转化于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性以及高表达Lac2酶的重组子作为工程菌Gs115(pGAP9k-lac2)。用甘油作为碳源在50L生物反应器中表达重组漆酶Lac2。用ABTS法测定发酵液中的漆酶活力。结果:在发酵30h时,其Lac2酶的表达达峰值,其活性为136.67U/L。其峰值的Lac2酶的表达量为50mg/L。表达产物具有分解ABTs的活性。结论:成功克隆了漆酶基因lac2,并首次实现用pGAP启动子在P.pastoris中组成型表达漆酶,为用P.Pastoris规模化生产漆酶奠定了基础。

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