文献类型： 中文期刊
作者： 周艳 1 ; 包红朵 1 ; 张辉 1 ; 张莉莉 1 ; 王冉 1 ;
作者机构： 1.江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室
关键词： 革兰阴性菌;禽致病性大肠杆菌噬菌体;噬菌体裂解酶
期刊名称： 中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2014 年 11 期
页码： 1109-1113
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为研究禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09编码的裂解酶对宿主大肠杆菌的裂解作用,克隆表达了禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09的裂解酶,并检测了裂解酶的菌体内外裂解活性。利用PCR扩增了禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09裂解酶基因(Lysin基因),构建了重组表达质粒pET-32a(+)-LysJS09,测序验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。在37℃IPTG浓度为1.0mmol/L诱导4h表达效果最好。重组融合蛋白LysJS09在BL21(DE3)中获得了高表达,在N端具有His标签,其分子质量约为38.9ku。重组融合蛋白以分泌型方式表达,经His-trap HP(GE)亲和层析柱纯化后获得的重组蛋白LysJS09的纯度为97%。裂解活性试验表明,该裂解酶单独使用和加入EDTA(0.1mol/L)均无体外酶活性;但菌体内裂解试验表明,表达的裂解酶对宿主菌具有一定的裂解作用。
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