文献类型： 中文期刊

作者： 何晓兰 ¹ ; 许玲 ¹ ; 徐照龙 ¹ ; 卫陪陪 ² ; 刘晓庆 ¹ ; 黄益洪 ¹ ; 张大勇 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业生物学重点实验室

2.南京农业大学生命科学学院

关键词： 大豆;根;酵母双杂交文库;耐盐性;互作蛋白

期刊名称： 上海农业学报

ISSN： 1000-3924

年卷期： 2013 年 29 卷 06 期

页码： 20-23

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了高效研究大豆耐非生物胁迫的分子调控网络,运用SMART(Switching Mechanism at 5'End of the RNA Transcript)与DSN(Duplex-Specific Nulease)相结合的技术构建了栽培大豆高盐胁迫下根部组织的酵母双杂交cDNA文库。提取高质量的总RNA,利用Oligo(dT)_(16)引物反转录合成cDNA后,经DSN处理,然后利用Advantage 2聚合酶进行长片段PCR扩增,电泳检测显示,产物均一,无高丰度条带,片段范围在0.75~5.00 kb;RT-PCR结果显示,GmActin基因在均一化后表达明显降低,表明均一化效果较好;最后通过SMART同源重组交换技术在酵母菌株Y18 7中构建了酵母双杂交所需的cDNA文库。文库质量检测结果表明:cDNA文库的总独立克隆数为5.61×10~6 cfu、文库滴度为3.4×10~(10)cfu/mL、重组率大于90%、插人片段长度为0.5~3.0 kb,主要集中在1.0 kb左右。