文献类型： 中文期刊

作者： 钱艳红 ¹ ; 宋帅 ¹ ; 温肖会 ¹ ; 牛瑞辉 ¹ ; 杨燕秋 ¹ ; 郑博彬 ¹ ; 袁子国 ² ; 罗胜军 ¹ ;

作者机构： 1.广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站

2.华南农业大学兽医学院

关键词： 旋毛虫;血清学诊断;Ts14-3-3;原核表达;管式化学发光免疫分析

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2024 年 57 卷 022 期

页码： 4578-4588

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【背景】旋毛虫（Trichinella spiralis）是一种食源性人兽共患寄生线虫，被列为世界七大食源性寄生虫，在家畜中，旋毛虫主要感染猪，并且能够通过猪肉及副产品传播给人类，不仅给我国生猪养殖产业带来了巨大的经济损失，而且严重危害人类健康和公共卫生安全。【目的】建立一种灵敏度高，特异性强，快速自动化的猪旋毛虫血清学检测方法,为阻止人兽共患寄生虫病的传播提供帮助。【方法】利用基因克隆和原核表达技术构建原核表达载体，通过诱导表达获得旋毛虫14-3-3重组蛋白，并验证其反应原性。用制备的重组蛋白包被磁性微粒，以此为检测抗原建立化学发光免疫分析方法，并对建立的方法进行条件优化。最后对优化后的方法进行临界值的界定及特异性、敏感性和重复性的确定；通过对来自广东省和贵州省不同养猪场的1 000份猪临床血清样本进行检测，评估该检测方法的实用性及符合率。【结果】成功表达并纯化出Ts14-3-3重组蛋白，该蛋白能特异性识别猪旋毛虫阳性血清中的抗体。建立的检测方法经过优化，结合缓冲液最佳pH为5,Ts14-3-3重组蛋白最佳包被量为5μg·mg^-1-beads，活化剂最佳使用量为50μg·mg-1-beads,1%BSA封闭效果最好，酶标二抗最佳稀释度为1﹕40 000，最佳反应时间为10 min，待检样本最佳孵育时间为5 min，最佳酶促反应时间为2 min。最后经过评估，该检测方法的临界化学发光值为374 185 RLU，与猪弓形虫、猪球虫、猪结肠小袋纤毛虫、猪繁殖与呼吸综合征、经典猪瘟、猪伪狂犬和猪口蹄疫抗体均无交叉反应，该检测方法与现有ELISA检测方法相比敏感性更高，批内和批间重复性均小于10%，检测的1 000份临床猪血清样本中旋毛虫抗体阳性率为0.6%，与市售ELISA试剂盒检出总符合率为98.18%。【结论】成功建立了猪旋毛虫抗体管式化学发光免疫分析检测方法，该检测方法特异性强，稳定性好，与ELISA方法相比更灵敏，快速，临床检测符合率高。