文献类型： 中文期刊
作者： 魏远征 1 ; 董浚键 1 ; 卢迈新 1 ; 孙成飞 1 ; 田园园 1 ; 叶星 1 ;
作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所
关键词： 尼罗罗非鱼;唾液酸结合型免疫球蛋白样凝集素;重组蛋白;真核表达;结合活性
期刊名称： 水产学报
ISSN： 1000-0615
年卷期： 2015 年 39 卷 03 期
页码： 327-335
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为获得尼罗罗非鱼Siglecs like融合蛋白,开展相关Siglecs like蛋白的功能研究,深入了解罗非鱼与无乳链球菌相互作用机制。本研究利用前期构建的3个含Siglecs like ORF的克隆质粒,PCR扩增获得Siglec-1、Siglec-4b和Siglec-14 like的膜外段序列,插入真核表达载体pc DNA3.1(+)h Ig G1 Fc中,双酶切、测序鉴定后转染COS-7细胞。q PCR、Western-blot对目的蛋白的表达进行检测;亲和层析法纯化融合蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯化效率。ELISA检测融合蛋白与GBS的结合活性。测序结果显示,成功构建3个融合蛋白真核表达载体pc DNA3.1(+)h Ig G1 Fc-Siglecs like/Ex。检测结果显示,转染细胞中3个Siglecs/Ex-Fc融合蛋白在mRNA和蛋白水平都有高效表达,且过柱后的融合蛋白具有较高纯度;3个融合蛋白与罗非鱼源GBS的结合活性较对照组均有显著差异。研究表明,利用真核表达系统成功制备了具有较高纯度的尼罗罗非鱼3种Siglecs融合蛋白,且均有与GBS的结合活性。
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