文献类型： 中文期刊
作者： 王海英 1 ; 叶星 2 ; 白俊杰 2 ; 夏仕玲 2 ; 劳海华 2 ; 简清 2 ; 王琳 2 ;
作者机构： 1.上海水产大学生命科学技术学院
2.中国水产科学研究院珠江水产研究所
关键词： 唐鱼;β-肌动蛋白启动子;红色荧光蛋白;转基因;显微注射;表达
期刊名称： 中国水产科学
ISSN： 1005-8737
年卷期： 2008 年 15 卷 01 期
页码： 47-54
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 利用PCR技术克隆唐鱼(Tanichthy salbonubes)β-actin基因。所克隆的β-actin基因片段为1464bp,包含长为1374bp的启动调控区和90bp的部分开放阅读框。启动调控区包括105bp的β-actin基因上游调控序列、第一个外显子和第一个内含子。上游调控序列中含有对转录起重要作用的CAATBox、TATABox、CArGBox等元件。将唐鱼β-actin启动调控区克隆到红色荧光表达载体pDsRed2-1上,并显微注射到唐鱼受精卵中,荧光显微镜观察红色荧光蛋白(RFP)的表达。结果表明,RFP在转基因唐鱼中的表达阳性率较高,最高可达51.8%,且RFP的表达水平较高。PCR检测转基因唐鱼的部分器官组织,在被检组织器官中均能检测到外源RFP基因;而RT-PCR以及Southernblot验证显示RFPmRNA的表达有所不同;Southern blot检测肌肉组织基因组DNA,可见比阳性载体大的杂交条带。说明所检测的组织中已发生外源基因RFP的整合,但有些组织存在表达水平较低或者不表达的现象。本实验分离到的β-actin基因启动子序列具有有效的驱动功能,可启动外源基因在唐鱼体内的高效表达,从而为下一步进行功能基因的转化研究奠定基础。
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