文献类型： 中文期刊

作者： 刘淼 ¹ ; 徐黎明 ¹ ; 卢彤岩 ¹ ; 赵景壮 ¹ ; 曹永生 ¹ ; 刘红柏 ¹ ; 尹家胜 ¹ ; 张金凤 ¹ ; 冯剑 ² ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

2.本溪艾格莫林实业有限公司

关键词： 传染性造血器官坏死病毒(IHNV);聚合酶蛋白;RT-LAMP;可视化检测

期刊名称： 中国水产科学

ISSN： 1005-8737

年卷期： 2014 年 21 卷 05 期

页码： 1065-1071

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 将逆转录环介导的等温扩增技术(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)引入到鱼类的传染性造血器官坏死病病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)检测中,建立了简单、快速、灵敏的IHNV检测方法。针对IHNV的聚合酶蛋白基因(polymerase protein,L)设计特异性引物,以IHNV基因组RNA为模板,在反转录酶和Bst DNA聚合酶的作用下进行RT-LAMP,反应产物添加SYBR Green I荧光染料后,肉眼观察阳性样本表现为荧光绿色,阴性样本表现为红棕色。2%琼脂糖凝胶电泳检测结果与可视化检测结果一致。该方法实现了检测结果的可视化。特异性分析显示该方法不与传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)及病毒性出血性败血症病毒(viral haemorrhagic septicaemia virus,VHSV)发生交叉反应,并且可检测不低于10 pfu的IHNV RNA。本研究所建立的IHNV RT-LAMP可视化检测方法具有灵敏度高、特异性好、成本低、不依赖任何专门的仪器设备的优点,其检测结果直观可视化,可实现现场高通量快速检测。