文献类型： 中文期刊
作者： 李淼 1 ; 李春玲 1 ; 岳磊 1 ; 宋帅 1 ; 杨冬霞 1 ;
作者机构： 1.广东省农业科学院兽医研究所
关键词： 副猪嗜血杆菌;外膜蛋白P5;抗原表位
期刊名称： 中国兽医学报
ISSN： 1005-4545
年卷期： 2014 年 34 卷 01 期
页码： 50-55
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5能诱导机体产生免疫保护反应,同时可以用于特异性的血清学诊断,本试验选取P5蛋白进行抗原表位鉴定。首先通过PCR扩增P5F1(1~204aa),P5F2(170~296aa)及P5F3(280~371aa)3个片段,PCR产物分别定向克隆到表达载体pET32a(+)中表达纯化。根据ELISA和Western blotting结果确定P5F3片段(280-371aa)是Omp P5的免疫优势决定区。为了进一步对该免疫优势决定区进行抗原表位鉴定,设计了一套11个部分重叠的短肽,这些短肽覆盖全部280~371aa片段。每一个短肽合成1对寡核苷酸链,退火后插入表达载体pGEX-6p-1,与GST进行融合表达。用HPS阳性血清进行ELISA和Western blotting扫描,鉴定出其表位位于336 TGNTCDAVKGRKALIT351。通过序列分析证实该抗原表位在不同的HPS菌株中高度保守。本试验确定了位于HPS Omp P5上的一个抗原表位,为建立一种方便、快捷、适用于现地大规模样品检测的鉴别诊断方法奠定了基础,同时也为HPS新型亚单位疫苗的研制,以及研究病原菌感染和机体免疫过程中P5蛋白与宿主体内相应分子之间的相互作用提供了有用信息。
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