文献类型： 中文期刊

作者： 周霞 ¹ ; 温肖会 ¹ ; 赵亮 ¹ ; 翟颀 ¹ ; 吕殿红 ¹ ; 罗胜军 ¹ ; 贾春玲 ¹ ; 周秀蓉 ¹ ; 牛佳伟 ¹ ; 陈天宝 ¹ ; 贺东生 ¹ ; 翟少伦 ¹ ;

作者机构： 1.广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站;华南农业大学兽医学院/广东省人兽共患病预防与控制重点实验室;西藏农牧学院动物科学学院;岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心

关键词： 塞内卡病毒;探针;实时荧光定量PCR;检测

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2023 年 44 卷 006 期

页码： 1-6

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为加强塞内卡病毒(SVA)在不同宿主的诊断及流行病学监测与防控,根据GenBank中发表的SVA VP1 基因区域设计一对特异性引物和带有Taq Man 发光基团标记的探针,构建重组阳性质粒并用作建立实时荧光定量RT-PCR方法的模板,对反应体系和条件进行优化,构建标准曲线并验证该方法的特异性、敏感性和重复性.结果显示,该方法的最适退火温度为 55℃,最佳引物和探针浓度分别为 0.2 μmol/L和 0.4 μmol/L,最佳反应循环数为 45,Ct值与标准品浓度的对数线性关系好.对猪源、鼠源及牛源 SVA和其他动物病毒(O 型口蹄疫病毒、水疱性口炎病毒、牛病毒性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒、边界病毒、猪库布病毒、牛库布病毒、山羊鼻内肿瘤病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛结节性皮肤病病毒、牛冠状病毒、D型流感病毒、蓝舌病毒)的核酸检测结果显示,除猪源、鼠源及牛源 SVA 为阳性外,其他病毒核酸为阴性.该方法最低检测限为 2.66×101 拷贝/μL,重复试验中组内和组间变异系数均小于 0.1%.建立的检测多宿主 SVA Taq Man RT-qPCR方法具有良好的特异性和稳定性,为SVA在不同宿主间的疾病诊断与流行病学调查或监控提供了快捷的方法.