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基于PRLR-JAK-STAT5信号传导通路测定鹅催乳素的新方法

文献类型： 中文期刊

作者： 宋金委 1 ; 李辉 2 ; 陈哲 2 ; 施振旦 2 ; 王振勇 1 ;

作者机构： 1.山东农业大学动物科技学院

2.江苏省农业科学院畜牧研究所

关键词： 鹅催乳素受体;信号转导;STAT5;荧光素酶报告基因;催乳素活性

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2016 年 47 卷 07 期

页码： 1389-1395

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在建立鹅催乳素(Goose prolactin,gPRL)的高灵敏度的测定方法。本研究设计出基于PRLR-JAKSTAT5信号通路的荧光素酶报告基因系统。首先克隆鹅PRLR基因CDS区序列,合成信号转导和转录激活因子5(Signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)信号应答序列,并分别插入真核表达载体pCMV6-Entry和荧光素酶报告载体pGL3-Enhancer中,构建成为信号接收载体和信号应答载体。然后将两载体同筛选基因载体pEZX-MR03及内参载体pRL-TK共转染到HEK293T细胞中,经嘌呤霉素筛选后获得稳定转染的转基因细胞株。分别用终浓度为0、30、60、90ng·mL~(-1)的PRL刺激转基因细胞,通过qRT-PCR和双荧光素酶检测系统测定在不同PRL浓度下转基因细胞株中荧光素酶(Luciferase,Luc)基因的相对表达量和相对活性的变化。筛选出10株成功整合有全部4个转基因载体的转基因细胞株,经过不同浓度PRL刺激后,筛选出一株细胞,其荧光素酶基因表达量和酶活性均表现出随PRL浓度升高而上调的趋势。结果表明,建立的基于PRLR-JAK-STAT5信号传导系统检测鹅PRL生物活性的新方法是可行的,为准确测定家禽PRL奠定基础。

  • 相关文献

[1]鹅催乳素受体基因cDNA5′端序列克隆. 傅泽红,邢光东,刘铁铮,孔鸽萍. 2007

[2]鹅催乳素受体基因cDNA5t端序列克隆. 傅泽红,邢光东,刘铁铮,孔鸽萍. 2007

[3]植物TIR1/AFBs基因家族研究进展. 滕青云,乐丽娜,宋冰倩,陈英. 2020

[4]辣椒应答冷信号转导机制研究进展. 潘宝贵,钱恒彦,戈伟,刘金兵,郭广君,刁卫平,王述彬. 2019

[5]油菜素内酯参与调控植物生长发育与抗逆性的机制及其育种应用研究. 曹清河. 2015

[6]禾谷镰刀菌cAMP受体类GPCR生物信息学分析. 马聿迪,张旭. 2017

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