文献类型： 中文期刊
作者： 秦逸飞 1 ; 陈蓉 2 ; 施振旦 2 ;
作者机构： 1.仲恺农业工程学院动物科技学院
2.江苏省农业科学院畜牧研究所
关键词： 鹅;VDR基因;克隆;多克隆抗体
期刊名称： 中国畜牧兽医
ISSN：
年卷期： 2024 年 003 期
页码： 1194-1202
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 【目的】维生素D3（vitamin D3,VD3）是一类重要的类固醇激素，参与调控动物体内多种生理活动，具有生物活性的VD3代谢物1,25（OH）2D3通过与维生素D受体（vitamin D receptor, VDR）结合发挥生物学功能。试验旨在克隆鹅VDR基因CDS序列并制备鹅VDR多克隆抗体，为后续开展VDR介导VD3调控鹅体内多种生理活动的分子机制研究提供基础支撑。【方法】通过基因克隆方法获得鹅VDR基因CDS序列，并采用生物信息学方法对其编码蛋白进行结构和功能预测分析。通过基因合成和亚克隆方法构建鹅VDR基因重组表达质粒，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达和镍柱纯化后获得鹅VDR重组蛋白。以纯化的鹅VDR重组蛋白作为免疫原，制备兔抗鹅VDR多克隆抗体，采用间接ELISA法检测抗体效价，采用Western blotting检测抗体特异性。【结果】试验成功克隆了鹅VDR基因编码区序列，长度为1 356 bp,编码451个氨基酸残基。该编码蛋白与鸡VDR蛋白的相似性高达91.4%,无信号肽和跨膜结构域，N-端含有核定位序列，且含有DNA结合域和配体结合域2个保守结构域，属于类固醇/甲状腺激素受体超家族成员。试验成功构建了pET-30a（+）-VDR重组质粒，并诱导表达鹅VDR重组蛋白。纯化后的重组蛋白纯度高达90%以上，且大小符合预期（52 ku）。试验制备了兔抗鹅VDR多克隆抗体，其抗体效价＞1∶1 093 500;除肝脏组织外，该多克隆抗体在产蛋鹅肾脏、十二指肠、空肠和回肠组织中均能够识别天然VDR蛋白的2种亚型。【结论】试验成功克隆了鹅VDR基因CDS序列，并制备了兔抗鹅VDR多克隆抗体，该多克隆抗体特异性高，可用于后续鹅体内VDR介导的生物学功能研究。
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