文献类型： 中文期刊

作者： 李永刚 ¹ ; 曾伟伟 ¹ ; 王庆 ¹ ; 殷亮 ¹ ; 王英英 ¹ ; 梁红茹 ¹ ; 刘春 ¹ ; 石存斌 ¹ ; 吴淑勤 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所

关键词： 草鱼呼肠孤病毒;HZ08株;S10编码蛋白;多克隆抗体

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2014 年 38 卷 03 期

页码： 449-456

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究草鱼呼肠孤病毒(GCRV)HZ08株S10基因节段编码蛋白的可能功能,采用PCR方法扩增草鱼呼肠孤病毒HZ08株S10基因节段,并把该基因节段克隆至表达载体pET-32a(+),获得的重组表达载体pET-32a-S10转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE分析鉴定后,再通过变性、过Ni柱纯化、透析复性纯化获得目的蛋白。然后用纯化的重组蛋白免疫昆明小白鼠,制得多克隆抗体,用间接ELISA方法测定抗体效价,用Western blot和IFA(间接免疫荧光试验)鉴定抗体特异性。结果表明,SDS-PAGE分析表达的重组蛋白约为53 ku,大小与预期相符,目的蛋白主要存在于包涵体中;过Ni柱纯化、透析复性纯化后的重组蛋白纯度可达97.4%;间接ELISA测得制备的多克隆抗体效价约为1∶106,Western blot和IFA结果显示,制备的多克隆抗体能识别HZ08毒株,表明S10编码蛋白为GCRV-HZ08株的结构蛋白。