文献类型： 中文期刊
作者： 师红亚 1 ; 董浚键 1 ; 张德锋 1 ; 孙成飞 1 ; 田园园 1 ; 曾庆凯 1 ; 卢迈新 1 ; 叶星 1 ;
作者机构： 1.农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室
关键词： 尼罗罗非鱼;无乳链球菌;荚膜多糖合成基因;基因敲除;生物学特性
期刊名称： 中国水产科学
ISSN： 1005-8737
年卷期： 2017 年 24 卷 005 期
页码： 977-987
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为探究尼罗罗非鱼无乳链球菌(GBS)荚膜多糖合成基因cpsE和neuA对菌株生物学特性的影响,本研究利用同源重组的方法,构建了GBS的cpsE与neuA的单基因缺失突变株.具体方法为:用Infusion-PCR的方法分别构建带有氯霉素抗性基因的cpsE与neuA基因敲除重组质粒pSET4s-cpsE和pSET4s-neuA.将构建好的质粒电转化入GBS感受态细胞中,通过改变培养温度实现双交换和质粒丢失,最后经氯霉素抗性筛选获得疑似敲除株.通过菌落PCR、RT-PCR及DNA测序等方法对疑似敲除株进行验证.结果显示GBS的两个突变株△cpsE和△neuA被成功构建.在此基础上,通过生物学功能分析比较基因缺失突变株△cpsE、△neuA与野生株在菌株生长速率、荚膜多糖厚度、唾液酸含量和毒力方面的差异.结果发现缺失突变株△cpsE和△neuA的生长速度与野生株无显著差异,但荚膜多糖厚度、唾液酸含量和菌株毒力均显著低于野生株.进一步研究显示,cpsE是鱼源GBS荚膜多糖合成的关键基因,neuA基因则是荚膜多糖唾液酸化的关键基因,它们的缺失导致了GBS荚膜唾液酸含量的降低,且显著降低了菌株的毒力.
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