文献类型： 中文期刊

作者： 余斌 ¹ ; 华炯钢 ¹ ; 刘跃生 ² ; 赵灵燕 ³ ; 倪征 ¹ ; 叶伟成 ¹ ; 云涛 ¹ ; 陈柳 ¹ ; 徐辉 ¹ ;

作者机构： 1.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所

2.嘉兴职业技术学院

3.浙江省动物疫病预防控制中心

关键词： 鸭坦布苏病毒;DⅢ结构域;串联表达;间接酶联免疫吸附试验

期刊名称： 浙江畜牧兽医

ISSN： 1005-7307

年卷期： 2014 年 39 卷 05 期

页码： 1-6

摘要： 为建立特异性和敏感性较高的鸭坦布苏病毒(DTMUV)抗体检测方法,采用原核表达系统对DTMUV E蛋白的DⅢ结构域进行了双串联融合表达,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白大小约25 Ku。Western blot结果显示,经亲和层析纯化的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应。以纯化的重组DⅢ蛋白作为包被抗原,初步建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法。采用梯度稀释法对ELISA各种反应条件进行优化,确定最适工作条件。重组抗原最适包被浓度为5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,兔抗鸭酶标抗体最适稀释度为1∶1000;抗体临界值S/P≥0.336判定为阳性,S/P≤0.287判定为阴性,介于两者之间为可疑。该方法检测禽流感病毒、鸭源新城疫、鸭甲肝病毒、鸭圆环病毒、鸭细小病毒、经典呼肠孤病毒及新型鸭呼肠孤病毒等血清均为阴性,4个批次批内与批间重复试验的OD值变异系数分别为6.21%~7.27%和3.4%~7.2%,显示该法具有很好的特异性、稳定性和重复性。用建立的间接ELISA与中和试验分别对108份疑似鸭坦布苏病血清样品进行检测,两种方法的阳性符合率为83.3%。