文献类型： 中文期刊

作者： 潘晓艺 ¹ ; 沈锦玉 ¹ ; 曹铮 ¹ ; 尹文林 ¹ ; 郝贵杰 ¹ ; 徐洋 ¹ ; 姚嘉赟 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院鱼类健康与免疫重点实验室浙江省淡水水产研究所

关键词： 哈维氏弧菌;大黄鱼;胞外蛋白酶;表型克隆

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2010 年 0 卷 10 期

页码： 178-181+187

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 哈维氏弧菌是引起大黄鱼疾病的主要致病菌之一,胞外蛋白酶是哈维氏弧菌GYC1108-1的主要致病因子。利用表型克隆技术,用Sau3AⅠ将提取的哈维氏弧菌基因组DNA酶切成短片段,纯化回收1-5 kb的片段与BamH I酶切的pUC118在T4连接酶的作用下进行连接,并转化感受态细胞TG1,在含0.5%脱脂奶和100μg/mL氨苄青霉素的LB平板上筛选胞外蛋白酶阳性株,命名为YZ。测定阳性株YZ的胞外蛋白酶活性,并对阳性株的重组质粒的插入片段进行序列测定,分析开放阅读框,确定胞外蛋白酶基因编码区。发现蛋白酶基因的ORF编码531个氨基酸,在起始密码子ATG上游存在一个核糖体结合位点(SD),其上游的启动区与大肠杆菌的σ70启动区和枯草芽孢杆菌的启动区高度同源。在终止子(TAG)下游,存在两个反向重复序列,为推导的2个转录终止子。哈维氏弧菌胞外蛋白酶基因的克隆与诠释为哈维氏弧菌致病机理和疫苗的开发奠定了基础。