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气单胞菌属低温淀粉酶基因改造与原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 楚敏 1 ; 史应武 1 ; 顾美英 1 ; 杨红梅 1 ; 霍向东 1 ; 张志东 1 ;

作者机构： 1.新疆农业科学院微生物应用研究所/新疆特殊环境微生物实验室

关键词： 气单胞菌属;α-低温淀粉酶;基因改造;原核表达

期刊名称： 新疆农业科学

ISSN： 1001-4330

年卷期： 2024 年 61 卷 002 期

页码： 479-484

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]获取低温淀粉酶基因,分析其相关功能,为工业生产上的应用提供参考.[方法]以气单胞菌(Aeromonas)LA77 为出发菌株克隆低温α-淀粉酶基因,以BL-21(DE3)为宿主菌进行克隆.分析其它已知气单胞菌属低温α-淀粉酶基因同源性,设计特异引物,PCR扩增获得C13 片段,将其克隆到pMAL-2X,转化到BL-21(DE3)中,筛选蓝白斑,验证PCR及EcoRⅠ和HindⅢ的双酶切,获得高效表达生物工程菌株pMAL-2X-C13.设计定点突变引物,以 pMAL-2X-C13 为模板,获得低温淀粉酶基因突变株三株 C19、C29、C43.[结果]表达蛋白的分子大小为114kD,突变菌株C19 蛋白表达量均高于pMAL-2X-C13.[结论]低温淀粉酶基因突变株C19 比原始菌株pMAL-2X-C13 淀粉酶基因蛋白表达量更高.

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