文献类型： 中文期刊

作者： 陶淼 ¹ ; 梁提松 ² ; 肖朝耿 ² ; 刘明启 ² ; 关荣发 ² ;

作者机构： 1.中国计量大学浙江省生物计量及检验检疫技术重点实验室

2.中国计量大学浙江省生物计量及检验检疫技术重点实验室;浙江省农业科学院食品科学研究所

关键词： 淡水鱼;小清蛋白;纯化;过敏原;鉴定

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2016 年 24 卷 12 期

页码： 1908-1914

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 大多数食物过敏原的理化性质决定了蛋白质在消化道中的稳定性。模拟胃液(simulated gastric fluid,SGF)的稳定性是评估食物过敏的一个重要参数。为了解一种主要的鱼类过敏原小清蛋白(parvalbumin,PV)与来自鲤鱼(Cyprinus carpio)和鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)肌肉中的非致敏性蛋白在SGF和模拟肠液(simulated intestinal fluid,SIF)中的稳定性差异,本研究采用3种蛋白水解酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶和来自猪的胰凝乳蛋白酶)来模拟人(Homo sapiens)体肠道的消化蛋白酶;结合两次三氯乙酸沉淀法和凝胶过滤层析法纯化PV,通过Tricine-十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,Tricine-SDS-PAGE)和Western blot对3种蛋白在模拟肠胃液中的稳定性进行了评估。结果显示,鲤鱼和鲢鱼的PV都获得了分子量约10 k D的蛋白,同时在SGF中鲤鱼和鲢鱼的纯化PV也获得了相同的分子量蛋白。胃蛋白酶使原先的PV带几乎在60 min内完全降解,并观察到一些稳定的肽片段,而胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶在240 min后都无法有效降解PV。在SGF中的非致敏性鱼浆蛋白在很短的时间内迅速降解,而PV的消化时间延长。Western blot分析表明,抗鲢鱼PV多克隆抗体可以特异性地检测到PV及其降解产物。PV比非致敏性蛋白更能抵抗蛋白酶消化,相比胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶,胃蛋白酶处理能更有效地减少超敏反应。研究结果为未来低致敏性鱼产品的开发提供了理论参考。