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黄灯笼辣椒eIF4Es基因克隆及其酵母双杂交激活域载体构建

文献类型： 中文期刊

作者： 张真 1 ; 余乃通 2 ; 王健华 2 ; 张秀春 2 ; 武亚丹 3 ;

作者机构： 1.海南大学农学院中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室

2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

3.中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室海南大学农学院

关键词： eIF4E家族;酵母双杂交;载体构建;自激活

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2016 年 08 期

页码： 2066-2070

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过对辣椒全基因组数据库分析获得黄灯笼辣椒eIF4E基因家族的四个基因,设计两端带有Eco RⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物分别扩增四个基因的ORF,克隆到LexA-酵母双杂交系统的激活域载体pB42AD中,并构建pB42AD-eIF4E、pB42AD-eIF(iso)4E、pB42AD-eIF4E-Xm、pB42AD-n CBP9090重组载体。将重组质粒导入酵母菌株EGY48(p8op-Lac Z)中,进行重组激活域载体的毒性检验和自激活验证。结果表明,扩增获得了正确的黄灯笼辣椒Cc-eIF4E、Cc-eIF(iso)4E、Cc-eIF4E-Xm、Cc-n CBP9090基因ORF,并成功克隆到pB42AD载体中,同时转化有激活域载体的EGY48(p8op-Lac Z)在SD/-Trp/-Ura营养缺陷型平板上生长良好,在SD/-His/-Ura平板上不生长,说明重组质粒表达产物对该酵母细胞无毒性,对下游报告基因无自激活作用。本研究结果证明pB42AD-eIF4E、pB42AD-eIF(iso)4E、pB42AD-eIF4E-Xm、pB42AD-n CBP9090重组载体可用于该系统的互作蛋白筛选,为下一步通过酵母双杂交系统筛选与黄灯笼辣椒eIF4E家族蛋白相互作用的病毒蛋白奠定基础。

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