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人工合成靶序列快速构建多靶标RNAi表达载体

文献类型： 中文期刊

作者： 张秀春 1 ; 吴坤鑫 1 ; 赵平娟 1 ; 刘志昕 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所/农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室

关键词： 人工合成靶序列;番木瓜环斑病毒;番木瓜叶扭曲花叶病毒;RNAi表达载体

期刊名称： 广东农业科学

ISSN： 1004-874X

年卷期： 2016 年 43 卷 07 期

页码： 81-86

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 番木瓜环斑病毒(PRSV)正引起番木瓜毁灭性严重病害,番木瓜叶扭曲花叶病毒(PLDMV)也在威胁着目前转基因番木瓜的推广和应用。通过人工合成包含PRSV和PLDMV两种病毒的NIb和HcPro基因多个保守区域的靶序列作为模板,扩增两条长短不同但大部分重叠的靶序列,并通过引物设计时添加的特定酶切位点两个靶序列反向连接,形成以长靶序列的5’一部分序列作为发夹结构的环,不需要另外插入内含子序列的反向重复发夹结构的RNAi表达载体pPTN-LS。该方法构建的RNAi表达载体,不仅具有快速、稳定性高等优点,还能同时靶标PRSV和PLDMV两种病毒的NIb和Hc-Pro基因多个保守区域的靶序列,能有效提高沉默效率,为利用RNAi技术培育广谱、高效、稳定且安全性高,同时抗PRSV和PLDMV病毒病的转基因番木瓜新种质的奠定基础。

  • 相关文献

[1]番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因原核表达蛋白的抗血清制备及其检测应用. 赵芹,李华平,谢大森,何晓明,张曙光,罗少波. 2012

[2]侵染节瓜的3种病毒多重PCR检测体系的建立. 赵芹,李华平,谢大森,罗少波,彭庆务. 2011

[3]番木瓜畸形花叶病毒外壳蛋白基因的克隆及序列分析. 汪倩,谭德冠,吴丽娟,孙雪飘,张家明. 2012

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