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锦鲤疱疹病毒保存方法的筛选及比较

文献类型： 中文期刊

作者： 李莹莹 1 ; 曾伟伟 1 ; 王英英 1 ; 潘厚军 1 ; 刘春 1 ; 石存斌 1 ; 吴淑勤 1 ; 王庆 1 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部渔药创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室

关键词： 锦鲤疱疹病毒;CCB细胞;保存

期刊名称： 中国生物制品学杂志

ISSN： 1004-5503

年卷期： 2016 年 11 期

页码： 1154-1158

收录情况： CSCD

摘要： 目的筛选并比较锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)的保存方法。方法将患锦鲤疱疹病毒病(Koi herpesvirus disease,KHVD)的患病鱼组织分别采用-80℃超低温保存法、液氮超低温保存法、50%磷酸甘油缓冲液保存法、乙醇保存法及异丙醇保存法保存90 d,进行PCR鉴定,同时检测不同方法保存的患病组织对感染健康鱼及CCB细胞的影响。用KHV感染CCB细胞后,收集病毒液,分别于4、-20、-80℃及液氮中存放90 d,检测病毒感染力(TCID50)。结果 5种方法保存的患病鱼组织经PCR检测均为KHV阳性。于50%磷酸甘油缓冲液、乙醇及异丙醇中保存的患病鱼组织失去了感染健康鱼的能力,而于-80℃及液氮中保存的患病鱼组织均可使健康锦鲤感染KHV;仅保存于50%磷酸甘油缓冲液中的患病鱼组织可感染CCB细胞。于4及-20℃保存的CCB细胞病毒液的病毒感染力分别下降61%和50%,而于-80℃及液氮中保存的CCB细胞病毒液的病毒感染力仅下降7%。结论利用-80℃及液氮超低温保存法可长期保存患病组织病料和细胞病毒液,于50%磷酸甘油缓冲液保存的组织病料有利于进行病毒的细胞分离。

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