文献类型： 中文期刊

作者： 曾伟伟 ¹ ; 王英英 ² ; 尹纪元 ² ; 汤亚方 ² ; 李莹莹 ² ; 王庆 ² ; 高彩霞 ² ; 任燕 ² ; 刘春 ² ; 石存斌 ² ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所广东省水产动物免疫技术重点实验室农业农村部渔药创制重点实验室

2.中国水产科学研究院珠江水产研究所

关键词： 草鱼呼肠孤病毒;荧光定量PCR;免疫过氧化物酶单层细胞试验;间接免疫荧光试验;病毒滴度

期刊名称： 淡水渔业

ISSN： 1000-6907

年卷期： 2019 年 006 期

页码： 63-69

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了解决Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus genotypeⅡ,GCRV-Ⅱ)含量和滴度测定方法的选择问题,本研究利用荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)、免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)和间接免疫荧光试验(indirect fluorescent assay,IFA)三种方法来对GCRV-Ⅱ进行检测和含量测定,从特异性、敏感性、可靠性和检测结果的相关性来比较这三种方法对于GCRV-Ⅱ定量检测的差异.结果显示:qPCR、IPMA和IFA三种方法检测GCRV-Ⅱ的最低限分别为8.6、86和86拷贝/μL,qPCR的检测灵敏度比IPMA和IFA高一个数量级;特异性分析表明,qPCR、IPMA和IFA三种方法均只能检测出GCRV-Ⅱ型分离株,而其它病毒和未感染病毒的阴性对照细胞均为检测阴性,表明这三种方法均具有较高的特异性;3种方法分别检测60份已知临床样品,qPCR、IPMA和IFA的诊断敏感性和特异性分别为96.7%(29/30)和100%(30/30)、100%(30/30)和93.3%(28/30)及100%(30/30)和100%(30/30);三种方法对于GCRV-Ⅱ的定量检测结果中病毒拷贝数和病毒滴度之间具有较好的相关性,其拟合曲线分别为:Y(IPMA,TCID50/mL)=23.629X-536 174(qPCR,拷贝/mL)(R2=0.996)、Y(IFA,TCID50/mL)=20.318X-575 062(qPCR,拷贝/mL)(R2=0.995)和Y(IPMA,TCID50/mL)=1.161X-1 176(IFA,TCID50/mL)(R2=0.999).结果表明,GCRV-Ⅱ病毒滴度的测定,除了用IPMA和IFA外,也可以采用qPCR方法通过测定病毒的核酸拷贝数来测算其病毒滴度.