文献类型： 中文期刊

作者： 师红亚 ¹ ; 董浚键 ² ; 张德锋 ² ; 孙成飞 ² ; 田园园 ² ; 曾庆凯 ² ; 卢迈新 ² ; 叶星 ³ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室;上海海洋大学水产与生命学院

2.;中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室;上海海洋大学水产与生命学院

3.;中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室;上海海洋大学水产与生命学院;

关键词： 尼罗罗非鱼;无乳链球菌;荚膜多糖合成基因;基因敲除;生物学特性

期刊名称： 中国水产科学

ISSN： 1005-8737

年卷期： 2017 年 05 期

页码： 977-987

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探究尼罗罗非鱼无乳链球菌(GBS)荚膜多糖合成基因cpsE和neuA对菌株生物学特性的影响,本研究利用同源重组的方法,构建了GBS的cpsE与neuA的单基因缺失突变株。具体方法为:用Infusion-PCR的方法分别构建带有氯霉素抗性基因的cpsE与neuA基因敲除重组质粒pSET4s-cpsE和pSET4s-neuA。将构建好的质粒电转化入GBS感受态细胞中,通过改变培养温度实现双交换和质粒丢失,最后经氯霉素抗性筛选获得疑似敲除株。通过菌落PCR、RT-PCR及DNA测序等方法对疑似敲除株进行验证。结果显示GBS的两个突变株ΔcpsE和ΔneuA被成功构建。在此基础上,通过生物学功能分析比较基因缺失突变株ΔcpsE、ΔneuA与野生株在菌株生长速率、荚膜多糖厚度、唾液酸含量和毒力方面的差异。结果发现缺失突变株ΔcpsE和ΔneuA的生长速度与野生株无显著差异,但荚膜多糖厚度、唾液酸含量和菌株毒力均显著低于野生株。进一步研究显示,cpsE是鱼源GBS荚膜多糖合成的关键基因,neuA基因则是荚膜多糖唾液酸化的关键基因,它们的缺失导致了GBS荚膜唾液酸含量的降低,且显著降低了菌株的毒力。