文献类型： 中文期刊

作者： 杨奇 ¹ ; 韩芳婷 ¹ ; 刘启文 ¹ ; 蒋玲曦 ¹ ; 谭芙蓉 ¹ ; 吴潇 ¹ ; 赵凯 ¹ ; 王金斌 ¹ ; 唐雪明 ¹ ;

作者机构： 1.上海市农业科学院生物技术研究所

关键词： 转基因水稻;Cry2A杀虫蛋白;包涵体;表达;纯化

期刊名称： 上海农业学报

ISSN： 1000-3924

年卷期： 2013 年 29 卷 05 期

页码： 10-14

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过PCR方法从克隆载体上扩增转基因水稻中的抗虫基因cry2A,经限制性内切酶EcoRI和BamHI双酶切定向插入到原核表达载体pET-30a(+)中,成功构建了蛋白表达载体pET-30a(+)/Cry2A,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。通过对其表达条件进行优化,发现在IPTG浓度为0.4mmol/L、诱导时间为6h、诱导温度为30℃的表达条件下,目的蛋白表达量最高,大部分以包涵体形式表达。将包涵体裂解并用Ni-NTA亲和柱纯化,所得纯化蛋白在复性缓冲液中复性,最终得到有活性的高纯度目的蛋白。