文献类型： 中文期刊
作者： 杨光 1 ; 盛军 1 ; 陈亚东 1 ; 沙珍霞 1 ;
作者机构： 1.中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部海洋渔业可持续发展重点实验室;上海海洋大学水产与生命学院;青岛大学生命科学学院
关键词： 壳聚糖酶;枯草芽孢杆菌CH2菌株;壳寡糖;毕赤酵母;酶学性质
期刊名称： 中国水产科学
ISSN： 1005-8737
年卷期： 2017 年 24 卷 06 期
页码： 1288-1297
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 构建了枯草芽孢杆菌CH_2菌株(Bacillus subtilis CH_2)壳聚糖酶基因的真核表达载体p PIC9K-CH2-Cns,在毕赤酵母GS115(Pichia pastoris)中进行重组表达,获得了有生物学活性的重组壳聚糖酶,对重组壳聚糖酶的酶学特性及酶解产物进行了分析。结果显示,重组壳聚糖酶的分子量为29 k D,粗酶的比酶活达到133.60 U/mg,纯化后重组蛋白的比酶活为338.08 U/mg;该酶的最适作用温度为50℃,最适pH为4.5,酶动力学常数Vmax=24.39(μmol/mg)·min~(-1),Km=5.48 mg/m L;Fe2+、K+等对其酶活力有一定的激活作用,其中Mn~(2+)能使酶活力提升2.4倍,Ag~+、Mg~(2+)、Hg~(2+)、EDTA、EGTA和SDS等存在时则对其酶活力有强烈抑制作用。利用重组壳聚糖酶酶解壳聚糖,酶解产物主要为聚合度2~10的壳寡糖,且分布均匀。以上结果表明,枯草芽孢杆菌CH_2菌株壳聚糖酶基因在毕赤酵母GS115中成功表达,获得了一种内切型的高酶活力重组壳聚糖酶,该重组酶具有反应条件温和、酶解产物均一等特点,可被应用于海洋甲壳质加工应用中。
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