文献类型： 中文期刊

作者： 李尚琪 ¹ ; 徐梓明 ² ; 赵然 ³ ; 孙晓晴 ⁴ ; 张研 ⁵ ; 李炯棠 ⁶ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院生物技术研究中心

2.农业农村部水生动物基因组学重点实验室

3.北京市渔业生物技术重点实验室

4.中国水产科学研究院渔业工程研究所

5.上海海洋大学

6.水产科学国家级实验教学示范中心

关键词： 鲤上皮瘤细胞;细胞转染效率;高不饱和脂肪酸生物合成

期刊名称： 水产科学

ISSN： 1003-1111

年卷期： 2024 年 43 卷 002 期

页码： 252-263

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 鲤上皮瘤细胞是常用的鱼类细胞系,广泛使用在各种病毒学和基因功能研究中.利用细胞转染技术在鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究时,转染试剂和 DNA的剂量以及取样时间没有统一的数据支持.为解决该问题,选取两种常用转染试剂 Lipofectamine? 2000 和 FuGENE? HD,分别对荧光蛋白标记的多种质粒进行多配组转染试验,多温度、多时间节点追踪记录转染效率.28℃,以 35 mm 培养皿铺板,16μL Lipofectamine? 2000 和 4 μg DNA在转染后 48h达到最高转染效率(5.92±0.52)%;12 μL FuGENE? HD和 4 μg DNA在转染 72h后转染效率达到(9.81±0.33)%.为验证该条件,构建一个鲤高不饱和脂肪酸合成相关转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体蛋白α(PPARα)的 EGFP 标签载体,该载体利用两种转染试剂分别获得了约 4%和约 8%的转染效率.以实时荧光定量 PCR检测该转录因子对下游脂肪酸去饱和酶 2(fads2)基因的转录调控效应,虽然两种转染试剂本身可导致下游基因的上调,但与空载质粒组相比,两种转染试剂高表达转录因子均对下游靶基因产生了转录激活效应.本试验获得了常用转染试剂 Lipofectamine? 2000 和 FuGENE? HD在鲤上皮瘤细胞细胞转染时的最适转染试剂和DNA剂量和最优取样时间,并在一转录调控实例中进行了验证,试验结果为后续充分利用鲤上皮瘤细胞进行基因功能研究提供了数据支持,有助于更好地服务于渔业种质资源育种创新.