文献类型： 中文期刊

作者： 王雅欣 ¹ ; 杨晨茹 ¹ ; 赵宇杰 ¹ ; 孙晓晴 ² ; 李尚琪 ² ; 张研 ² ; 刘英杰 ² ; 李炯棠 ² ;

作者机构： 1.上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心

2.中国水产科学研究院生物技术研究中心/农业农村部水生动物基因组学重点实验室/北京市渔业生物技术重点实验室

关键词： 长链脂肪酸延长酶5(Elovl5);CRISPR/Cas9;基因敲入;鲤;高不饱和脂肪酸

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2020 年 28 卷 007 期

页码： 1165-1176

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： CRISPR/Cas9技术广泛应用于基因敲除,利用敲入包含荧光蛋白和目标基因的片段,有助于早期筛选实验动物.长链脂肪酸延长酶5(elongation of very long chain fatty acids 5,Elovl5)是鱼类调控高不饱和脂肪酸合成的关键酶之一.为在斑马鱼(Danio rerio)研究鲤(Cyprinus carpio)Elovl5活性,本研究构建包含Tol2序列、斑马鱼短链肌球蛋白2基因(myosin light chain 2,Mylz2)启动子、红色荧光蛋白基因(red fluorescence gene,DsRed2)、斑马鱼Elovl5启动子、鲤Elovl5基因、2A剪切肽和绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的载体,扩增获得一段长7.5 kb的片段.利用CRISPR/Cas9方法,将此片段敲入斑马鱼基因组.敲入成功的斑马鱼在受精72 h后开始于肌肉显红色荧光.对利用红色荧光筛选敲入成功的斑马鱼,进一步用PCR扩增DsRed2予以确证.在存活斑马鱼中,基因敲入阳性率为28.7%.相比对照组,仅在实验组观察到鲤Elovl5表达.实验组的18碳不饱和脂肪酸含量下降18.6%,20碳和22碳不饱和脂肪酸含量提高31.8%,其中20:4n-3不饱和脂肪酸含量是对照组的2.4倍(P<0.05).本研究采用CRISPR/Cas9技术,构建转鲤Elovl5斑马鱼,提高了斑马鱼高不饱和脂肪酸含量,为进一步研究鲤不饱和脂肪酸合成的遗传机制提供基础.