文献类型： 中文期刊

作者： 洪义国 ¹ ; 孙谧 ² ; 郑家声 ² ; 王跃军 ² ; 张云波 ² ; 郝建华 ² ; 王瑞娟 ² ; 向悟生 ² ;

作者机构： 1.青岛海洋大学海洋生命学院

2.青岛海洋大学海洋生命学院!266003,中国水产科学研究院黄海水产研究所海洋酶与酶工程开放实验室!青岛266071,青岛海洋大学海洋生命学院!266003,中国水产科学研究院黄海水产研究所海洋酶与酶工程开放实验室!青岛266071,中国水产科学研究院黄海水产研究所海洋酶与酶工程开放实验?

关键词： 低温碱性蛋白酶;基因克隆;序列测定

期刊名称： 海洋水产研究

ISSN： 1000-7075

年卷期： 2000 年 21 卷 04 期

页码： 46-53

收录情况： CSCD

摘要： 黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130具有稳定的分泌低温碱性蛋白酶的能力。将其染色体 DNA用 Sau3A 部分酶切后 ,低熔点琼脂糖回收 2 - 10 Kb的 DNA片段 ,用 Klenow大片段酶半补齐 ,与用 Sal 酶切且半补齐的质粒 p UC19连接后 ,转化 E.Coli.JM10 9,构建基因文库。用酪蛋白平板法和酶联免疫吸附 ( EL ISA)的活性筛选方法从基因文库中筛选到一株产海洋低温碱性酶的阳性克隆 (命名为p HH1)。序列测定分析表明 ,此重组质粒包含有长度为 768bp低温碱性蛋白酶基因的完整的开放读码框架 ( ORF)和上游基因调控序列。此片段编码由 2 56个氨基酸组成的酶 ,计算分子量为 330 0 0 Dal。通过 Southern杂交证实了此片段来自于黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130基因组 DNA。