文献类型: 中文期刊
作者: 赵新 1 ; 刘双 1 ; 刘娜 1 ; 李瑞环 1 ; 曹英芳 2 ; 兰青阔 1 ; 王永 1 ;
作者机构: 1.天津市农业科学院生物技术研究所
2.河北农业大学食品科技学院
关键词: 拷贝数;微滴数字PCR;转基因大豆;外源基因
期刊名称: 中国农业大学学报
ISSN: 1007-4333
年卷期: 2022 年 27 卷 001 期
页码: 58-66
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 为鉴定抗除草剂转基因大豆新品种'GE-J12,的外源基因插入拷贝数,以该转化体的外源插入目的基因G2-EPSPS和GAT的序列、3'转化体特异性序列为靶序列,设计PCR扩增引物和TaqMan探针,并对引物探针特异性进行鉴定,同时以大豆内标基因Lectin为参照,建立微滴数字PCR拷贝数检测体系.特异性试验结果显示,只有以抗除草剂转基因大豆'GE-J12'基因组DNA为模板才有扩增信号.以单株转基因大豆'GE-J12,基因组DNA为模板,进行外源目的基因G2-EPSPS和GAT、3'转化体特异性序列的微滴数字PCR检测,转基因大豆'GE-J12'的外源目的基因G2-EPSPS和GAT在基因组上的插入拷贝数均值分别为0.99和1.01.同时3'转化体特异性序列的拷贝数均值为1.00,验证单株转基因大豆'GE-J12'为纯合子,因此鉴定该单株转基因大豆'GE-J12'的外源基因在大豆基因组上为单拷贝插入,同时与Southern blot方法进行比较,结果一致.
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