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鸡γ干扰素在酵母中的分泌表达

文献类型： 中文期刊

作者： 魏雪涛 1 ; 李银 1 ; 刘宇卓 1 ; 张敬峰 1 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心

关键词： 鸡γ干扰素;克隆;分泌表达

期刊名称： 浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2009 年 21 卷 05 期

页码： 450-454

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据GenBank已发表的鸡γ干扰素(ChIFN-γ)cDNA基因序列设计一对引物,以ConA刺激8 h后的鸡全血淋巴细胞提取的总RNA为模板,通过RT-PCR方法克隆出ChIFN-γ基因,将其连接到pMD18-T载体上获得阳性重组质粒。测序结果表明,该ChIFN-γ与GenBank上发表的ChIFN-γ序列的同源性可达99.6%,其含有1个495 bp的开放性阅读框架,编码164个氨基酸。通过Kpn I和Not I两个酶切位点将该基因插入酵母表达载体(pPICZa-A),并将该重组酵母ChIFN-γ载体线性化,通过电转化使ChIFN-γ基因整合到酵母(X-33)基因组上,经甲醇诱导后,成功表达出ChIFN-γ。利用Western-blotting分析测定表达的ChIFN-γ蛋白的活性。结果表明,本试验得到的重组酵母ChIFN-γ是具有反应原性的蛋白。

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