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团头鲂(Megalobrama amblycephala)两种热休克蛋白70(HSP70s)的原核表达、纯化及鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 明建华 1 ; 谢骏 2 ; 徐跑 2 ; 戈贤平 2 ; 刘文斌 3 ; 叶金云 1 ;

作者机构： 1.湖州师范学院生命科学学院

2.中国水产科学研究院淡水渔业研究中心农业部淡水鱼类遗传育种和养殖生物学重点开放实验室

3.南京农业大学无锡渔业学院

关键词： 团头鲂;热休克蛋白70;原核表达;融合蛋白;纯化;鉴定

期刊名称： 海洋与湖沼

ISSN： 0029-814X

年卷期： 2012 年 43 卷 01 期

页码： 185-191

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用PCR方法扩增团头鲂组成型HSC70和诱导型HSP70基因完整的编码区片段,并分别克隆到原核表达载体pET-22b(+)中,然后转化大肠杆菌BL21(DE3),用1mmol/L IPTG在不同温度及时间下进行诱导表达。采用Ni-NTA His Bind Resins亲和层析和DEAE-Sepharose FF阴离子交换柱层析对目的蛋白进行纯化,并进行SDS-PAGE和Western-blotting分析。结果表明,成功构建了团头鲂两种重组表达质粒pET-22b(+)/Ma-HSC70和pET-22b(+)/Ma-HSP70,表达融合蛋白的相对分子量均约为72kDa,并能与兔抗人HSP70多抗进行特异性结合,这两种HSP70s融合蛋白经纯化后的纯度均达到95%以上。本实验选择融合蛋白Ma-HSC70在25℃和Ma-HSP70在30℃下分别诱导7h作为可溶性表达的最佳条件。

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