文献类型： 中文期刊
作者： 徐海 1 ; 侯红岩 1 ; 邓碧华 1 ; 郑其升 1 ; 侯继波 1 ;
作者机构： 1.江苏省农业科学院国家兽用生物制品工程技术研究中心
关键词： 禽流感病毒;抗原表位;佐剂;免疫原性
期刊名称： 中国生物工程杂志
ISSN： 1671-8135
年卷期： 2009 年 29 卷 02 期
页码： 42-47
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 以禽流感病毒保守的基质蛋白2胞外区(M2e)基因与核蛋白的两个T细胞表位(NP1、NP2)基因为基础构建原核表达载体pET-3M2e-NP1-NP2。利用IPTG诱导,目的蛋白以可溶性形式获得高效表达,Western blot分析表明重组蛋白能够与抗AIV M2e蛋白的抗体发生反应。将纯化的融合蛋白分别与弗氏佐剂、白油、壳聚糖3种佐剂进行混合以及适量诱导后的菌体与白油混合制成疫苗,肌肉注射免疫20日龄非免鸡,首免3周后加强免疫一次。免疫后每周定期采血,用ELISA方法检测抗M2e抗体水平;并在MDCK细胞上检测血清与病毒的结合能力;在鸡胚上检测血清的中和能力;利用流式细胞计数技术测定CD4+、CD8+T淋巴细胞数量的变化。结果表明,原核表达的融合蛋白能够刺激机体产生免疫反应,抗血清能够跟H9N2亚型禽流感病毒特异性结合,血清不能中和病毒但在低病毒含量感染时候抑制病毒的复制。流式细胞仪检测显示外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞数量在免疫后明显升高(P<0.05),具有细胞免疫的特征。佐剂对于免疫反应影响明显,其中弗氏佐剂组产生抗体最高,白油佐剂组次之,壳聚糖组抗体水平最低,菌体白油组产生抗体水平与白油佐剂组相当但维持时间较长。构建的融合蛋白可用于禽流感的预防,而选择高效的佐剂增强亚单位苗的免疫效果也是目前急需解决的问题。
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