文献类型： 中文期刊
作者： 陈丽敏 1 ; 施春雷 1 ; 王大鹏 1 ; 张道锋 1 ; 史贤明 1 ;
作者机构： 1.上海交通大学农业与生物学院中美食品安全联合研究中心微生物代谢国家重点实验室
关键词： 金黄色葡萄球菌;新型耐热核酸酶;定点突变;二级结构
期刊名称： 食品工业科技
ISSN： 1002-0306
年卷期： 2015 年 36 卷 17 期
页码： 156-160+169
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 本研究选取了F60、A62、T102和Y135这4个可能的关键位点,采用定点突变的方法成功构建了5个Nuc2的单点和多点突变体。体外表达并纯化这些核酸酶,对其活性、耐热性和二级结构进行测定。结果表明:经方差分析(p<0.05),T102M和F60A/A62L/T102M/Y135V的核酸酶活性与野生型相比较显著下降,并且F60A/A62L/T102M/Y135V的酶活性基本丧失;T102M和F60A/A62L的耐热性明显弱于野生型;T102M和F60V/A62L的二级结构中α-螺旋结构的含量明显低于野生型,F60A/A62L/T102M/Y135V的二级结构中包含有无规卷曲。因此,推断T102是维持Nuc2核酸酶活性、耐热性和二级结构稳定的一个关键位点;F60、A62、T102和Y135及其与邻近氨基酸之间的相互作用对维持Nuc2的性质稳定起着重要作用。
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