文献类型： 中文期刊

作者： 罗明菊 ¹ ; 李宁求 ² ; 林强 ² ; 牛银杰 ² ; 刘礼辉 ² ; 梁红茹 ² ; 罗霞 ² ; 付小哲 ² ;

作者机构： 1.上海海洋大学水产与生命学院

2.中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔用药物创制重点实验室广东省水产动物免疫技术重点实验室

关键词： 大口黑鲈;双RNA病毒;巢式RT-PCR;检测方法

期刊名称： 水产学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 009 期

页码： 1584-1591

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为有效预防大口黑鲈双RNA病毒（largemouth bass birnavirus, LBBV）,实验针对LBBV保守基因VP1设计特异性引物,构建重组质粒pMD-LBBV-VP1,通过优化PCR反应条件,提高检测方法的灵敏度和特异性,建立了大口黑鲈双RNA病毒的巢式RTPCR检测方法,并采用该方法对实验室2017—2020年收集的304株样本进行检测。结果显示,巢氏引物F1/R1、F2/R2最佳工作浓度均为4×10^-12 mol,最佳退火温度分别为64.1℃和61.5℃,当巢氏RT-PCR扩增35个循环时,可以检测质粒最低浓度为4.15个/μL拷贝数,最低模拟样品浓度为10² PFU/mL,与第1轮PCR相比,灵敏度均提高了10 000倍,同时检测9种不同病毒,仅LBBV出现明亮特异性条带,在304个样品中,第1轮PCR检出阳性样品14株,检出率为4.60%,巢式RT-PCR检出阳性样品28株,检出率为9.21%;本实验建立的巢式RT-PCR检测方法灵敏度高且特异性好,可用于LBBV的早期检测及防控。