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急性病毒性坏死病毒dUTPase基因的克隆、表达及其产物的酶学活性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 贾志磊 1 ; 王崇明 2 ; 任伟成 3 ; 梁彦韬 2 ; 曲朋 1 ; 李赟 1 ;

作者机构： 1.中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室

2.中国水产科学研究院黄海水产研究所

3.哥德堡大学

关键词： 栉孔扇贝;dUTP焦磷酸酶;急性病毒性坏死病毒;原核表达;酶学活性

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2011 年 35 卷 09 期

页码： 1320-1326

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据已测定完成的栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)基因组序列,设计特异性引物,以提取的发病扇贝组织总DNA为模板,PCR扩增得到编码AVNV dUTPase的开放阅读框ORF074,将产物克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建表达质粒pET32a-dut。然后,将其转化至E.coli BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE检测显示,诱导表达蛋白分子量约为46 ku,与预期表达蛋白大小一致。经Western-blotting及质谱分析鉴定,所表达蛋白即为重组dUTPase。表达产物经Co2+柱纯化后进行酶学活性测定。结果显示,重组dUTPase能特异性催化dUTP,EDTA可以抑制dUTPase的活性,而Mg2+可以增强其活性。

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