文献类型： 中文期刊

作者： 李莹 ¹ ; 瞿浩 ¹ ; 何静怡 ¹ ; 刘天飞 ¹ ; 王劼 ¹ ; 王艳 ¹ ; 舒鼎铭 ¹ ; 罗成龙 ¹ ;

作者机构： 1.广东省农业科学院动物科学研究所/畜禽育种国家重点实验室/广东省畜禽育种与营养研究重点实验室/广东省动物育种与营养公共实验室

关键词： 外泌体;超速离心;蔗糖密度;商业化试剂盒;鸡胚;分离方法

期刊名称： 广东农业科学

ISSN： 1004-874X

年卷期： 2020 年 47 卷 005 期

页码： 93-101

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]鸡胚蛋可用于改善机体免疫功能,研究不同提取方法对鸡胚组织中外泌体的分离效果,有利于深入解析鸡胚蛋生理功能.[方法]收集13胚龄惠阳胡须鸡胚蛋12枚(3组,4枚/组),通过酶消化、差速离心及过滤等前处理后将所获样品分为4份,通过超速离心法(UC)、蔗糖垫超速离心法(SDUC)、膜亲和法(exoEasy)以及聚乙二醇沉淀法(ExoQuick)4种方法分离提取外泌体,分别标记A~D.比较BCA蛋白浓度测定、透射电镜、纳米流式和标志蛋白流式检测等4种方法获得的外泌体蛋白浓度、形态、大小及其标志性蛋白表达情况.[结果]4种方法均能获得符合外泌体直径分布(40~200 nm)、具有外泌体典型微囊结构特征的囊泡物质,外泌体蛋白浓度和颗粒浓度由高到低依次为D>C>A>B,但D样品中含有其他聚团杂质蛋白;表面标志蛋白CD63、CD81阳性率变化趋势为B>D>C>A.[结论]综合考量外泌体的纯度、形态、大小及其标志性蛋白表达情况,根据供试组织样品来源、试验条件和目的可优选蔗糖垫超速离心法或膜亲和法,如需高纯度外泌体可首选蔗糖垫超速离心法,样品稀有或不具备超速离心设备则选用膜亲和法.