文献类型： 中文期刊

作者： 刘欣钊 ¹ ; 张芳毓 ¹ ; 魏天 ¹ ; 王成宇 ¹ ; 王思月 ¹ ; 刘悦 ¹ ; 曲可 ¹ ; 朱日宁 ¹ ; 鞠安琪 ¹ ; 马惠海 ¹ ; 张建峰 ¹ ; 王永志 ¹ ;

作者机构： 1.吉林农业大学生命科学学院;吉林省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 流产衣原体;原核表达;Western-blot;间接ELISA;抗体检测

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2023 年 001 期

页码： 78-84

收录情况： 北大核心

摘要： 为了建立检测绵羊流产衣原体MOMP(main outer membrane protein)蛋白抗体的间接ELISA方法,试验将编码MOMP蛋白的基因序列经密码子优化后进行基因合成,并克隆和原核表达截短蛋白,以该蛋白为抗原建立绵羊流产衣原体抗体的间接ELISA方法,优化该方法的反应条件,同时验证其特异性、敏感性和重复性,最后用该方法对临床待检羊血清进行检测,并与间接血凝试验试剂盒的检测结果进行比较.结果表明:截短蛋白MOMP201~390的表达、纯化效果最好.经探索,优化后的间接ELISA方法最优反应条件:抗原包被浓度为1 mg/L,37℃包被2 h,待检血清最佳稀释度为1:100,血清和酶标二抗的最佳作用时间分别为45 min、60 min.建立的间接ELISA方法的敏感性较高,特异性和重复性较好,使用该方法从209份临床待检羊血清样本中检出47份阳性血清,与间接血凝试验试剂盒分别检测临床待检羊血清样本86份,总符合率为80.23%.说明基于截短蛋白MOMP201~390建立的绵羊流产衣原体抗体间接ELISA方法可用于绵羊流产衣原体临床血清抗体的检测及流行病学调查.