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猪抑制素α亚基基因克隆及其原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 陈倩 1 ; 黎敏义 1 ; 刘颖 1 ; 施振旦 2 ;

作者机构： 1.华南农业大学动物科学学院

2.江苏省农业科学院畜牧研究所

关键词： 蓝塘猪;抑制素α亚基;成熟肽;克隆;表达

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2013 年 29 卷 001 期

页码： 108-113

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了克隆猪抑制素仪亚基基因和表达其重组蛋白质,本试验采集发情期蓝塘猪卵巢组织,并从中快速抽提总RNA,以此作为模板并根据猪抑制素α亚基基因编码区序列(GenBank号:NM214189)设计合成1对引物,经反转录扩增获得了猪抑制素α亚基基因编码区全长序列.另外,再设计1对特异性引物以扩增抑制素仅亚基成熟肽cDNA,并将扩增产物克隆到表达载体pRSETA的Bgl Ⅱ和EcoRⅠ酶切位点之间,构建重组质粒plNH-SCAU并转化Escherichia.coliBL21(DE3)株.转化重组质粒pINH-SCAU的重组菌经IPTG诱导后表达的重组蛋白质分子量为20000,经Ni-NTA凝胶纯化和兔抗牛抑制素仅亚基抗体的特异性免疫反应,证明为抑制素α亚基重组融合蛋白质.对蛋白质表达条件的比较,结果显示重组菌经常规诱导剂0.05mmot/LIPTG诱导5h后的细菌生长密度OD600值为2,抑制素α亚基重组融合蛋白质的最高表达量为总菌体蛋白质量的32.00%.采用自动诱导培养基替代IPTG,在诱导18h后能使菌液的OD600达13,同时自动诱导的抑制素融合蛋白质表达量占菌体总蛋白质的32.57%.因此利用自动诱导培养基可以获得较佳的抑制素重组整合蛋白质.

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