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黄鳍棘鲷重组IL-1β的表达及生物学活性检测

文献类型： 中文期刊

作者： 刘振兴 1 ; 张殿昌 1 ; 李建柱 1 ; 江世贵 1 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院南海水产研究所

关键词： 黄鳍棘鲷;rIL-1β;Percoll不连续密度梯度离心;细胞培养;RT-PCR

期刊名称： 渔业科学进展

ISSN： 1000-7075

年卷期： 2009 年 30 卷 01 期

页码： 99-104

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 将扩增得到的黄鳍棘鲷Acanthopagrus latus白细胞介素1β(Interleukin 1β,IL-1β)基因克隆到表达载体pQE30,并转化到大肠杆菌M15中进行表达。采用Ni2+-Chelating Sepharose FF层析对重组蛋白进行纯化,并用梯度透析对纯化蛋白进行复性。经SDS-PAGE和Western Blot分析,获得了分子量为21kD的重组白细胞介素1β(Recombinant Interleukin 1β,rIL-1β)。采用Percoll不连续密度梯度离心分离黄鳍棘鲷头肾白细胞,在分离液密度1.080g/ml的界面上可以有效富集白细胞。用不同终浓度的rIL-1β和5μg/ml脂多糖(LPS)刺激培养的黄鳍棘鲷头肾白细胞,23℃培养4h后提取细胞的总RNA,经RT-PCR半定量检测,当培养基中rIL-1β的浓度达到20ng/ml时可以提高IL-1β基因的转录水平,与5μg/mlLPS的刺激效果相当,表达的重组蛋白表现出很好的生物学活性。

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