文献类型： 中文期刊

作者： 陶健 ¹ ; 徐黎明 ¹ ; 刘淼 ¹ ; 赵景壮 ¹ ; 曹永生 ¹ ; 卢彤岩 ¹ ; 尹家胜 ¹ ; 刘红柏 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

关键词： 传染性造血器官坏死病毒;G蛋白;原核表达;抗血清

期刊名称： 淡水渔业

ISSN： 1000-6907

年卷期： 2015 年 02 期

页码： 49-55

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以传染性造血器官坏死病毒Sn1203株(IHNV-Sn1203)基因组RNA提取物为模板,利用生物信息学软件分析,通过RT-PCR一步法扩增截短的G蛋白基因序列(约375 bp),将其克隆到表达载体p ET-27b中,构建重组表达质粒p ET-27b-IHNV-short G,通过大肠杆菌Rosetta表达菌株获得高效表达。在IPTG浓度为0.25 mmol/L时,37℃诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析显示目的蛋白相对分子质量约为14 000,符合预期大小,并以包涵体的形式表达,4 h时目的蛋白表达量最大。蛋白经变性、复性处理后获得不带任何标签的纯化蛋白,并利用该蛋白制备兔抗血清。ELISA结果显示,兔抗血清的效价为1∶80 000,说明制备的兔抗血清能够识别表达的重组蛋白;间接免疫荧光结果表明兔抗G蛋白血清具有良好的特异性,并且与VHSV参考毒株没有任何交叉反应。