文献类型： 中文期刊
作者： 綦世金 1 ; 华再东 2 ; 刘西梅 3 ; 华文君 3 ; 郑新民 3 ;
作者机构： 1.贵州大学
2.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室
3.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
关键词： 猪肌抑素基因;CRISPR/Cas9表达载体;同源重组
期刊名称： 中国生物化学与分子生物学报
ISSN： 1007-7626
年卷期： 2016 年 32 卷 10 期
页码： 1161-1167
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 肌抑素是肌肉增生的负调控因子,为改良家畜产肉性状的重要候选基因。本研究设计了Cas9/sgRNA表达载体与供体DNA,通过电转染方法将其导入猪PK15细胞,经G418抗性筛选和荧光蛋白标记甄别,筛选到带阳性标记的细胞克隆。通过跨界PCR、长距离PCR、Western印迹、Southern印迹及PCR产物测序,证明了猪肌抑素的第3外显子序列特异性同源重组事件的发生。在猪肌抑素的第3外显子区域找到了1个有效的CRISPR/Cas9打靶位点,带阳性标记的细胞克隆经过多次筛选分离,获得了肌抑素单等位基因失活的稳定细胞系,为深入研究肌抑素的功能提供了重要的实验材料。
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