文献类型： 中文期刊

作者： 唐国盘 ¹ ; 黄安群 ² ; 孙志鹏 ¹ ; 匡友谊 ¹ ; 王胜杰 ² ; 王大伟 ² ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

2.河南牧业经济学院动物科技学院

关键词： CRISPR/Cas9;T7核酸内切酶I;限制性内切酶;非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳;检测

期刊名称： 淡水渔业

ISSN： 1000-6907

年卷期： 2019 年 49 卷 002 期

页码： 20-26

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 比较三种常用的CRISPR/Cas9基因敲除检测变异方法,从准确性、 耗时、 成本和应用限制等方面进行评估.采用T7核酸内切酶I、 限制性内切酶和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分别对利用CRISPR/Cas9方法敲除的fibinb和ngs基因的50尾斑马鱼(Danio rerio)突变纯合个体和突变杂合个体进行检测,用野生型个体作对照;同时用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对CRISPR/Cas9方法敲除的ogn和ddb1基因的突变杂合个体进行了检测.结果表明:三种方法均能够区分突变杂合个体,其中T7核酸内切酶I检测法耗时最短,但该方法不能用于鉴定突变纯合个体;限制性内切酶检测法能够用于鉴定纯合个体,但需要有特异性的识别位点;非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法能够区分纯合和杂合个体,对序列无依赖性,能够检测出序列中存在的所有变异.成本上,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法最经济;限制性内切酶的价格存在较大的差异,因此检测成本依赖于酶的价格.三种检测方法各有优缺点,在应用实践中可根据试验需要选择合适的方法.