文献类型： 中文期刊

作者： 赵景壮 ¹ ; 徐黎明 ¹ ; 刘淼 ¹ ; 曹永生 ¹ ; 尹家胜 ¹ ; 刘红柏 ¹ ; 卢彤岩 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黑龙江水产研究所

关键词： 虹鳟;IgM;基因克隆;抗血清

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2014 年 38 卷 08 期

页码： 1175-1181

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了能够成功表达虹鳟IgM,本研究利用生物信息学软件对虹鳟IgM的亲水性及抗原性进行了分析,根据GenBank收录的虹鳟IgM重链恒定区,参照生物信息学分析结果,设计用于扩增截短的IgM基因的引物,以虹鳟头肾RNA提取物为模板,利用RT-PCR方法扩增虹鳟截短的IgM重链恒定区部分基因片段,连接原核表达载体pET-27b,利用大肠杆菌Rosetta进行表达。SDS-PAGE及HPLC结果显示,纯化后截短的IgM大小约为47.7 ku,且纯度达到90%。利用其制备兔抗血清后ELISA分析结果显示,所制备的兔抗血清与本研究所表达的截短IgM蛋白的反应效价为1∶40 000,与虹鳟血清提取的全长IgM反应效价为1∶20 000并且呈现出抗原计量依赖性。研究表明,重组IgM蛋白与虹鳟血清中的天然IgM重链恒定区具有近似的结构,利用其所制备的兔抗血清能够与虹鳟鱼体中的天然IgM发生特异性反应。