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CRISPR/Cas9技术制备猪肌肉生长抑制素基因敲除细胞

文献类型： 中文期刊

作者： 华文君 1 ; 毕延震 1 ; 刘西梅 1 ; 张立苹 1 ; 肖红卫 1 ; 郑新民 1 ; 华再东 1 ; 任红艳 1 ;

作者机构： 1.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： CRISPR/Cas9;肌肉生长抑制素;基因敲除;表达

期刊名称： 基因组学与应用生物学

ISSN： 1674-568X

年卷期： 2015 年 34 卷 05 期

页码： 945-949

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用CRISPR/Cas9技术制备质粒HRX-2MCS和PX330,两种质粒转染湖北白猪胎儿成纤维细胞,G418筛选抗性细胞株。收集培养细胞提取总DNA,分子定位PCR法检测绿色荧光蛋白(GFP)基因在猪肌肉生长抑制素(MSTN)基因外显子上的定位整合情况,得到T1靶位点整合细胞5株和T3靶位点整合细胞3株。Q-PCR定量分析结果表明3108号阳性细胞株MSTN基因m RNA表达量减少50%,实验获得的基因敲除细胞可以用于体细胞核移植法制备MSTN基因敲除猪的研究。

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