文献类型： 中文期刊
作者： 柳学周 1 ; 刘芝亮 1 ; 徐永江 1 ; 王妍妍 1 ; 李春广 1 ;
作者机构： 1.农业部海洋渔业可持续发展重点实验室
关键词： 半滑舌鳎;GH;原核表达;活性分析
期刊名称： 海洋与湖沼
ISSN： 0029-814X
年卷期： 2014 年 45 卷 06 期
页码： 1374-1379
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 根据半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)生长激素(GH)基因的c DNA全长序列设计引物克隆得到其全长552个碱基成熟肽序列。利用RT-PCR方法将扩增片段克隆到原核表达载体p ET-28a上,实现了GH成熟肽在大肠杆菌BL21(DE3)中的融合表达。融合蛋白分子量为26 k Da,在IPTG诱导4h时目的蛋白表达量最高,占细菌总蛋白的41.5%,主要以包涵体形式存在。Western-blotting分析表明GH融合蛋白可特异性地被6×His抗体识别。诱导表达后的菌液沉淀经纯化和复性后,获得大小为26 k Da的纯化GH融合蛋白。以ELISA方法检测纯化后的GH融合蛋白显示其具有免疫学活性。本研究为认识半滑舌鳎生长轴的调控机制提供了基础资料。
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