文献类型： 中文期刊
作者： 李斌 1 ; 徐永江 1 ; 柳学周 1 ; 史宝 1 ; 王滨 1 ; 朱学武 1 ;
作者机构： 1.中国水产科学研究院黄海水产研究所
关键词： 半滑舌鳎;食欲素;原核表达;生物活性
期刊名称： 水产学报
ISSN： 1000-0615
年卷期： 2016 年 40 卷 09 期
页码： 1462-1471
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为了在蛋白水平上认识半滑舌鳎食欲素A(orexin A)的摄食调控作用及机制,利用原核表达载体pET32a成功构建了重组半滑舌鳎orexin A/pET32a质粒,转化至大肠杆菌BL21后经IPTG诱导获得了N端含6个组氨酸的半滑舌鳎orexinA重组蛋白。获得的重组蛋白大小为24.9 ku,32℃下用1.0 mmol/L的IPTG诱导6 h目的蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的52.8%,并主要分泌在上清液中。Western blotting免疫印迹表明,获得的orexin A重组蛋白可被6×His抗体特异性识别。Ni~(2+)-NTA亲和层析柱纯化获得了高纯度的半滑舌鳎orexin A重组蛋白。下丘脑离体孵育实验表明,获得的orexin A重组蛋白能显著影响半滑舌鳎下丘脑NPY mRNA,orexin mRNA的表达水平和NPY肽的分泌,表明获得的重组蛋白具有生物活性。研究结果可为探究orexin A在半滑舌鳎摄食代谢中的作用机制及研制高效绿色的促摄食制剂提供基础资料。
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