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嗜冷杆菌EASTSEAG5-1415脂肪酶基因的克隆和序列测定

文献类型: 中文期刊

作者: 卜宪娜 1 ; 孙谧 2 ; 郝建华 2 ; 郑家声 1 ;

作者机构: 1.中国海洋大学海洋生命学院

2.中国水产科学研究院黄海水产研究所

关键词: 嗜冷杆菌;低温碱性脂肪酶;基因克隆;序列测定

期刊名称: 高技术通讯

ISSN: 1002-0470

年卷期: 2005 年 15 卷 002 期

页码: 94-99

收录情况: EI ; 北大核心 ; CSCD

摘要: 从东海深海底泥中筛选到一株产低温碱性脂肪酶的海洋细菌EASTSEAG5-1415,经鉴定为嗜冷杆菌PSYCHROBACTER GLACINCOLA.将其染色体DNA用SAU3AI部分酶切后,低熔点琼脂糖回收2~10KB 的DNA片段,用KLENOW大片段酶半补齐,与用SAL I酶切半补齐的质粒PUC19连接后,转化E.COLI.JM109构建基因文库.用平板测活法从基因文库初步筛选到两株产碱性脂肪酶的阳性克隆,采用ELISA反应进一步鉴定.序列测定分析表明,两个重组质粒中都包含长度为951BP的碱性脂肪酶基因的完整开放阅读框架(ORF)和上游基因调控序列.此片段编码有317个氨基酸组成的酶,计算分子量为35 000 DAL.通过SOUTHERN杂交证实了此片段来自于嗜冷杆菌PSYCHROBACTER GLACINCOLA EASTSEAG5-1415基因组.

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