文献类型： 中文期刊

作者： 毕延震 ¹ ; 刘西梅 ² ; 华再东 ² ; 张立苹 ² ; 郑新民 ² ; 肖红卫 ² ;

作者机构： 1.动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室

2.动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室,湖北省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 链霉菌噬菌体ΦC31整合酶;假attP位点;基因工程动物;猪;定点修饰

期刊名称： 中国生物化学与分子生物学报

ISSN： 1007-7626

年卷期： 2014 年 30 卷 02 期

页码： 187-193

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 高效与特异的基因组定点修饰是基因工程动物研究的前沿与难点.链霉菌噬菌体ΦC31整合酶能介导含attB位点的外源基因定点整合于多种真核生物基因组的假attP位点,可维持外源基因的正常结构及高效表达.本文探讨ΦC31整合酶介导外源基因在猪基因组内定点整合的分子基础.构建含attB位点的报告载体pEGFP-N1-attB,与ΦC31整合酶表达载体pCMV-INT共转染猪肾PK15细胞,G418筛选获得单克隆细胞系.实时荧光定量PCR筛选出单拷贝整合的转基因细胞系.TAIL-PCR鉴定出1个猪基因组假attP位点,位于猪1号染色体,watson链,坐标114220087-114220126,命名为pig-attP-1.测序结果显示,pEGFP-N1-attB在attB位点处断开插入到pig-attP-1.用荧光计测定细胞培养基上清EGFP含量发现,该转基因细胞系EGFP的表达水平是本底的50倍(13500 AU vs.280 AU),表明pig-attP-1是利于外源基因高效表达的"友好位点".该研究不仅为实现外源基因在猪基因组内的定点整合提供了新策略,也为创制基因工程猪、建立动物生物反应器等研究注入了新思路.