文献类型： 中文期刊

作者： 王晶 ¹ ; 张晓磊 ¹ ; 白玉 ¹ ; 盛宇欣 ¹ ; 关海涛 ¹ ; 温洪涛 ¹ ;

作者机构： 1.黑龙江省农业科学院农产品质量安全研究所农业农村部谷物及制品质量检验测试中心(哈尔滨)国家市场监管重点实验室(谷物及制品质量与安全)

关键词： 转化体;聚合酶链式反应;扩增体系;反应条件;玉米

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2024 年 40 卷 012 期

页码： 34-44

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】为解决不同转化体扩增体系和反应条件不统一问题，建立通用PCR检测体系，进而提升转化体鉴定效率。【方法】通过收集国内外转基因材料的转化体特异性PCR鉴定方法，比较其扩增体系和反应条件的差异，选择其中使用频率最高的参数作为通用参数。利用不同玉米转基因材料，验证转化体特异性通用PCR定性检测方法。【结果】建立通用普通PCR扩增体系：总体积25.0 μL、25 mmol/L MgCl₂溶液1.5 μL、2.5 mmol/L dNTPs混合溶液2.0 μL、靶标和内参上下游引物终浓度0.4 μmol/L、Taq DNA聚合酶0.025 U/μL、25 mg/L DNA模板2.0 μL，LOD 0.1%；反应条件：94℃预变性5 min、94℃变性30 s、58℃退火30 s，72℃延伸30 s、共进行35次循环、72℃终延伸7 min。通用实时荧光PCR定性鉴定扩增体系：总体积20.0 μL、25 mmol/L MgCl₂溶液2.0 μL、dNTPs混合溶液（各2.5 mmol/L）1.6 μL、靶标和内参上下游引物和探针终浓度0.4 μmol/L、Taq DNA聚合酶0.04 U/μL、25 mg/L DNA模板2.5 μL，LOD 0.1%；反应条件为95℃预变性5 min、95℃起始变性15 s、60℃退火延伸60 s、40个循环。【结论】不同转化体材料可以利用本研究建立的通用PCR扩增体系和反应条件进行检测。