文献类型： 中文期刊

作者： 孙彦伟 ¹ ; 刘建营 ¹ ; 徐维加 ² ; 田云 ¹ ; 王晶钰 ³ ; 宋长绪 ⁴ ;

作者机构： 1.广东省动物防疫监督总所

2.云南出入境检验检疫局

3.西北农林科技大学动物科技学院

4.广东省农业科学院兽医研究所

关键词： 日本脑炎病毒;荧光定量PCR;TaqMan探针

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2007 年 28 卷 08 期

页码： 13-17

摘要： 通过RT-PCR方法克隆了日本脑炎病毒(JEV)N基因片段序列,构建重组质粒作为标准阳性模板,同时根据GenBank中的靶序列设计了荧光定量RT-PCR的1对引物和1条TaqMan探针。通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了JEV检测的荧光定量PCR方法。结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109～100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×109、1.0×108和1.0×107拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为17.33、20.52和23.90,变异系数分别为0.54%、0.74%和0.53%,均小于5%。对阳性组织病料的检测表明该方法的灵敏度高出常规PCR,与套式PCR(nested-PCR,nPCR)具有相近的灵敏度。