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猪胰岛素样生长因子-ⅠmRNA实时荧光定量PCR定量标准的构建

文献类型： 会议论文

第一作者： 肖书奇

作者： 肖书奇 1 ; 戴立胜 1 ; 张树敏 2 ; 赵中利 1 ; 孙玉成 1 ; 高妍 1 ; 李毅 1 ; 赵志辉 3 ; 张嘉保 1 ;

作者机构： 1.吉林大学实验动物中心

2.吉林省农业科学院

3.吉林大学畜牧兽医学院

关键词： 猪;胰岛素样生长因子Ⅰ;参考标准;RT-PCR技术

会议名称： 中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十三届学术研讨会

主办单位： 中国畜牧兽医学会

页码： 97-101

摘要： 本文采用RT-PCR的方法利用肝组织提取的总RNA制备猪胰岛素样生长因子Ⅰ(pIGF-Ⅰ)cDNA目的片断,与pMD-18T vector连接成重组质粒并转化E.coli DH5α.联合应用PCR鉴定、a互补法、限制性酶切和序列分析法鉴定其特异性.测定纯化的重组质粒A260,确定浓度并以此制备实时荧光定量PCR(FQ-PCR)梯度浓度参考标准.结果表明:pIGF-Ⅰ cDNA目的片断成功制备并获得稳定的重组质粒,保持了目的片断序列的特异性和完整性,成功构建了pIGF-Ⅰ实时FQ-PCR的定量参考标准.

分类号： S828`Q522

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